Colonias del invitado desconocido AQUÍ MÁS CALIDAD | Foto por: Manuel Bermudo
Durante el aislamiento de algunos candidatos a PGPR (bacterias que ayudan al desarrollo de plantas) encontré dos tipos de colonias distintas en una misma placa, así que seguí con el proceso de purificación buscando tener cepas puras en cada placa, consiguiendo además el máximo nivel de biodiversidad.
Después de numerosos pases terminé aislando un candidato que formaba colonias con un aspecto bastante llamativo, color blanco-opaco, de textura seca e incrustrante (como un liquen), formandor de colonias con bordes muy irregulares.
Distintas colonias en TSA 1/4, las más oscuras son el origen de la invitada
En TSA 1x las colonias son mucho más "densas" y algo más regulares
Colonias del invitado desconocido AQUÍ MÁS CALIDAD | Foto por: Manuel Bermudo
Las placas sembradas con esta bacteria mostraban siempre formas distintas, irregulares y muy llamativas, así que sospechamos de la presencia de más de un microorganismo. Se intentó separar cada una sin éxito alguno, ya que lo que crecía en las nuevas placas no siempre era igual que lo que existía en las placas madre. Sin embargo visto al microscopio, por muy distintas que fuesen las colonias (siempre dentro de su parecida textura seca) se observaba la misma morfología bacteriana...Bacilos formadores de esporas.
Bacilos esporulados vistos a 100x. Tinción: azul de metileno AQUÍ PARA MÁS DETALLE
Así que parece ser, me encuentro ante una comunidad de bacilos imposibles de separar, o se trata de una misma bacteria que forma distintas colonias en el mismo medio de cultivo....
La verdad es que estoy bastante confundido. Os dejo fotos de algunas colonias vistas en detalle y un pequeño vídeo el último aislamiento que hice (tras resuspender en agua para tratar de separar) Si se os ocurre algo (que no implique gastarse cientos de euros en secuenciar) estaré encantado de intentarlo, siempre dentro de mis posibilidades.
PD: Los aislamientos por zonas son terribles, pero antes de pensar mal...os diré que por muy poca biomasa que tomara y por muy separadas que estén las líneas, todo termina junto y con un aspecto de liquen blanco. Es muy complicado conseguir colonias aisladas.
color blanco-opaco, de textura seca e incrustrante (como un liquen), formandor de colonias con bordes muy irregulares.
ResponderEliminaresas colonias parecen de streptomyces.
Respecto a bacillus formadores de colonias aéreas me aucerdo de unos muy famosos que se mueven en ejambre, eso sí, la especi ni zorra.
y esto no tiene nada que ver pero es bonito: http://en.wikipedia.org/wiki/Paenibacillus
Es muy bonita Paenibacillus, diría que tengo algo parecido en una de mis paleoplacas... A ver si lo miro !
EliminarPor la morfologia de colonia puede ser cualquier cosa. Yo ya tuve algun aislado con esa pinta pero no formaban esporas. Por las esporas, seguramente Firmicutes pero vete tu a saber cual. Decenas de generos que forman esporas y cada cual con un puñado de especies.
ResponderEliminarPara aislar colonias individuales trata de obtener un cultivo liquido y despues diluciones seriadas. Tambien puedes resuspender una muestra de la placa en un eppendorf con salino o MQ y lo mismo. Si ves que se se pegan demasiado, un buen rato en el vortex o ultrasonidos.
La verdad es que hoy en dia hacer identificacion a pelo sin secuenciar es una locura dada la cantidad de especies que hay y que gran parte no aparece en el Bergey o similares.
Hace un par de años envie a secuenciar, y ni siquiera hice la extraccion de DNA, que sale mas barato, y nos salia por 80-100 euros por aislado. Si estas en la universidad seguramente tengas servicio de sequenciacion y mas barato que uno externo. Y posiblemente mas barato que hacer todas las pruebas bioquimicas necesarias para una identificacion decente, eso sin contar el tiempo necesario para todo ello.
Si, conseguí mejores resultados resuspendiendo, pero la cosa tampoco mejoró demasiado. Respecto a secuenciar... el problema es que el proyecto está en "standby" lo mismo lo cancelan que sigue, y no se puede gastar dinero fácilmente : /
EliminarSaludos !!